糖基化太复杂赛默飞离子色谱让你迎糖而上

来源 赛默飞世尔科技   2019-8-28   访问量757评论(0)

糖基化分析的重要性

单抗药物是近年来发展最快的药物品种在整个药物市场产值中已经占有超过12%的份额超过1200亿美元目前全球已经批准的单克隆抗体药物超过了80个年销售额增长率超过30%主要应用于恶性肿瘤自身免疫性疾病炎症性疾病等治疗领域国内各大医药企业也聚焦于单抗药物的研发

单克隆抗体结构主要由Fab和Fc两大功能区组成在Fab段和Fc段特定的位点存在糖基化修饰这些糖基化修饰发挥着极其重要的作用?#32791;?#22815;维持抗体?#30446;?#38388;构象稳定抗体的结构提高药物的热稳定性糖链结构还能保护抗体不受某些蛋白酶水解延长半衰期提高药效Fc段的糖基化修?#20301;?#20250;对抗体的安全性造成影响因此抗体的糖?#22270;?#27979;在产品质量控制中?#22836;?#24120;重要

目前的分析方法

糖链常用的分析方法有?#21512;?#33394;谱法毛细管电泳法和高效阴离子交换色谱法但无论是?#21512;?#33394;谱法还是毛细管电泳法都必须使用专用试剂进行荧光衍生?#25628;?#29983;耗时长4小?#20445;?#19988;会导致唾液酸丢失不能准确分析含唾液酸样品且也无法分析磷酸化糖及硫酸化糖而离子色谱无需衍生定量准确可以覆盖分析所有糖类型

离子色谱-糖分析方法

高效阴离子交换色谱-脉冲?#25165;?#26816;测法是目前领先的糖分析方法具有无需衍生分离度好灵敏度高同时适用所有糖修饰形态等诸多优势

?#26434;?#21333;抗药物的复杂糖基化离子色谱可?#28304;?#19977;个方面给予解析

1.糖链水平的分析N糖图谱测定

Ρ糖基化修饰的糖链可以通过肽糖苷酶或肽糖苷酶酶切作用或者肼解作用从糖蛋白上?#22836;?#20986;来糖链经净化后可直接进样无需衍生避免?#25628;?#29983;化过程中唾液酸化聚糖的结构改变


Ofatumamab的N糖图谱

离子色谱还可?#38498;?#39640;分辨质谱联用实现对色谱峰的鉴别以Q Exactive为代表的Orbitrap超高分辨?#25163;?#35889;对未标记的糖具有高灵敏度可解析糖链结构?#25165;?#26816;测器高分辨质谱和离子色谱联用可同时解决糖链的定?#38498;?#23450;量分析


2.单糖组成测定

单抗糖链主要由葡萄糖胺半乳糖胺?#20197;?#31958;葡萄糖半乳糖甘露糖唾液酸等单糖组成单糖组成测定可?#28304;?#22522;础水平上对单抗的糖组成差异给出解析

?#26434;u行?#31958;和氨基糖的分析通常使用酸水解的方式使蛋白中的单糖?#22836;Q?strong>样品水解后直接进样无需衍生


3.唾液酸的测定

唾液酸存在于单抗的糖链末端?#26434;?#21333;抗在生物体内功能的发挥起着相当重要的作用影响药物的有效性唾液酸的差异是人源抗体?#25512;?#20182;生物抗体差异的一个?#21103;z?#21822;液酸的?#22836;牛?#21487;使用温和酸水解或酶解使用离子色谱分析游离的唾液酸样品可直接进样无需衍生不同结构的唾液酸在CarboPac PA10色谱柱上可以得到快速高效的分离


综上所述离子色谱IC可用于单抗药物的聚糖图谱分析单糖组成分析唾液酸测定等方面糖?#22270;?#20986;覆盖率更高适用于复杂唾液酸修饰糖型极大的完善和推动了糖蛋白类药物N-糖链的质控分析

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